包被涂層方法：

  注意：在康寧支持網(wǎng)頁上發(fā)布了具體的應(yīng)用程序*?？祵幓啄せ|(zhì)產(chǎn)品的蛋白質(zhì)濃度是批次特異的并提供在分析證明書上。通過計算需要的特定蛋白濃度(mg/mL)獲得了稀釋康寧基底膜基質(zhì)產(chǎn)品的一致結(jié)果。為了維持凝膠化的一致性，我們推薦不要將康寧基底膜基質(zhì)稀釋到少于 3 mg/mL。請使用冰冷的無血清培養(yǎng)基來稀釋康寧基底膜基質(zhì)。通過在冰上移液管上下吸液或渦旋小瓶來混合。

薄層凝膠法
  1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。
  2. 將培養(yǎng)板放置在冰上，以 50 μl/cm2向生長表面加入康寧基底膜基質(zhì)。
  3. 將培養(yǎng)板放置在 37 °C ，30 分鐘。
  4. 如果有必要的話，請在使用無血清培養(yǎng)基輕柔漂洗前吸出未結(jié)合的材料。請確保移液器的吸頭不要刮擦包被的表面。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。

厚層凝膠法
  1.  依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。
  2. 將培養(yǎng)板放置在冰上。向康寧基底膜基質(zhì)中加入細胞并使用預(yù)冷的移液管懸浮。以150-200 μl/cm2向生長表面加入康寧基底膜基質(zhì)。
  3. 將培養(yǎng)板放置在 37°C，30 分鐘?，F(xiàn)在可以添加培養(yǎng)基了。細胞也可以培養(yǎng)在這一凝膠的頂部。

薄層包被法
  1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。
  2. 使用無血清培養(yǎng)基將康寧基底膜基質(zhì)稀釋到需要的濃度。對于您的應(yīng)用程序，您應(yīng)該完成以經(jīng)驗為主的研究來確定您的最適包被濃度。
  3. 向被包被的容器中加入稀釋的康寧基底膜基質(zhì)。加入的量應(yīng)該足以容易地覆蓋整個生長表面。在室溫下培養(yǎng) 1 個小時。
  4. 吸出未結(jié)合的材料并使用無血清培養(yǎng)基輕柔地漂洗。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。

細胞復(fù)蘇：
  康寧中性蛋白酶(貨號 354235)，康寧細胞復(fù)蘇溶液(貨號 354253)。使用康寧細胞復(fù)蘇溶液在冰上 7 小時內(nèi)解聚康寧基底膜基質(zhì)能夠?qū)崿F(xiàn)將生長在康寧基底膜基質(zhì)上的細胞最有效地復(fù)蘇，或者使用中性蛋白酶，考慮到連續(xù)培養(yǎng)，中性蛋白酶作為一種金屬酶可以分散細胞。

注意事項
  因為康寧基底膜基質(zhì)在 10°C 以上會開始凝膠化，所以極其重要的是康寧基底膜基質(zhì)和所有的進入與康寧基底膜基質(zhì)接觸的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基都應(yīng)該預(yù)冷。產(chǎn)品需要放置于冰上，并在 2oC-6oC 的冰箱中或者冷室中過夜融化，蛋白濃度高時可能需要更多時間。操作康寧 Matrigel matrix時，我們建議使用預(yù)冷的移液管、吸頭和管子。在實驗的全部過程中請保持康寧基底膜基質(zhì)處于冰上。

常見問題
1.康寧高濃度 Matrigel matrix 用于哪些實驗？
康寧高濃度的 Matrigel matrix matrix 可適用于體內(nèi)應(yīng)用研究，如高濃度蛋白可促進腫瘤生長。高蛋白濃度同時可使康寧 Matrigel matrix 注射入小鼠皮下后保持完整，有利于注射的腫瘤細胞和/或血管生成因子保持原位，便于用于原位分析和/或以后的切除。

2.如何將康寧 Matrigel matrix 用于 3D 培養(yǎng)？怎樣制作 3D 膠？需要將細胞嵌入到康寧 Matrigel matrix 中嗎？
康寧高濃度的 Matrigel matrix 可適用于體內(nèi)應(yīng)用研究，如制備厚層包被用于 3D 細胞培養(yǎng)。細胞可以嵌在康寧 Matrigel matrix 中或者接種在康寧 Matrigel matrix 表面（覆蓋法）。

3.使用 Corning Matrigel matrix 時，需要將移液器吸頭和離心管預(yù)冷嗎？
是的。因為 Corning Matrigel matrix 在高于 10℃的條件下即會開始成膠，我們推薦操作 Matrigel matrix 時使用預(yù)冷的移液管、吸頭和離心管。

4.Corning Matrigel matrix 會快速聚合嗎？
Corning Matrigel matrix 在 22℃至 35℃時會快速聚合成膠。

5..什么情況下，需要使用無酚紅 Corning Matrigel matrix？
對于涉及顏色檢測的實驗，推薦使用無酚紅 Corning Matrigel matrix，如使用熒光染料或 Drabkins 法計數(shù)內(nèi)皮細胞成管實驗。對于子宮內(nèi)膜細胞培養(yǎng)，也需使用無酚紅 Corning Matrigel matrix。
此外，酚紅和非甾體雌激素結(jié)構(gòu)類似，有類雌激素效應(yīng)。在實驗動物體內(nèi)可能具有干擾內(nèi)分泌和荷爾蒙代謝的能力。

6.如何從 Corning Matrigel matrix 中收獲細胞？
推薦使用 Corning Dispase 或 Corning Cell Recovery Solution 來收獲培養(yǎng)在Matrigel matrix 中的細胞。

Corning Dispase 相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細胞懸液，不會損傷細胞或細胞表面蛋白。對于需要繼續(xù)接種培養(yǎng)或進行檢測的細胞，使用 Corning Dispase 不會產(chǎn)生損傷。此外，Corning Dispase 也可以用于組織分離。

對于代謝研究和 RNA 抽提，建議在 4℃使用 Corning Cell Recovery Solution 進行非酶反應(yīng)的細胞收獲。因為 Corning Matrigel matrix 中含有痕量的 RNA，進行RNA 分析時，應(yīng)設(shè)一個 Corning Matrigel matrix（不接種細胞）的對照組。

7.其它從 Corning Matrigel matrix 中收獲細胞的方法：
降低溫度至 4℃ - 6℃使 Matrigel matrix 解聚，需要一定的時間并且僅適合一部分應(yīng)用。
離心以破壞 Corning Matrigel matrix 結(jié)構(gòu)。