基因編輯技術(shù)在T細(xì)胞治療領(lǐng)域具有重要應(yīng)用價(jià)值，但Naive T細(xì)胞的直接基因編輯仍存在顯著挑戰(zhàn)，其低轉(zhuǎn)染效率一直是領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)瓶頸。ProteanFect轉(zhuǎn)染試劑盒最新實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，即使是未經(jīng)激活的Naive T細(xì)胞，也能實(shí)現(xiàn)基因編輯，為T細(xì)胞研究提供了更便捷、更接近生理狀態(tài)的實(shí)驗(yàn)方案。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法

以小鼠原代T細(xì)胞為模型，靶向Pdcd1基因，采用PT09-ProteanFect CRISPRMax Ultra小鼠原代免疫細(xì)胞基因編輯試劑盒進(jìn)行基因編輯實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)設(shè)置了三組不同處理?xiàng)l件：

D0組：T細(xì)胞分離后直接進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染后在包被抗體的培養(yǎng)板中繼續(xù)培養(yǎng)

D1組：T細(xì)胞激活培養(yǎng)1天后進(jìn)行轉(zhuǎn)染

D2組：T細(xì)胞激活培養(yǎng)2天后進(jìn)行轉(zhuǎn)染

所有組別在轉(zhuǎn)染后72小時(shí)檢測基因編輯效率。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示(如圖1所示)：

D0組(未經(jīng)激活直接轉(zhuǎn)染)的敲除效率達(dá)到54.2%

D1組(激活1天后轉(zhuǎn)染)的敲除效率為56.7%

D2組(激活2天后轉(zhuǎn)染)的敲除效率最高，達(dá)到80.2%

圖1：轉(zhuǎn)染72h后基因敲除效率

圖2：轉(zhuǎn)染72h后TIDE分析結(jié)果

以上結(jié)果表明：

Naive T細(xì)胞直接轉(zhuǎn)染可行性：未經(jīng)激活的T細(xì)胞也能實(shí)現(xiàn)有效的基因編輯，打破了傳統(tǒng)認(rèn)知中必須預(yù)激活的限制

激活狀態(tài)影響編輯效率：隨著激活時(shí)間的延長，基因編輯效率逐步提高，D2組效率顯著高于D0和D1組

實(shí)驗(yàn)靈活性提升：ProteanFect轉(zhuǎn)染試劑盒為研究者提供了更多選擇，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇直接轉(zhuǎn)染或激活后轉(zhuǎn)染

研究意義與應(yīng)用前景

本研究的突破性發(fā)現(xiàn)為T細(xì)胞研究領(lǐng)域帶來多重價(jià)值：

簡化實(shí)驗(yàn)流程：Naive T細(xì)胞直接轉(zhuǎn)染可節(jié)省1-2天的激活時(shí)間，加速研究進(jìn)程

保持細(xì)胞原始狀態(tài)：避免預(yù)激活可能帶來的細(xì)胞狀態(tài)改變，更真實(shí)反映生理?xiàng)l件下的基因編輯效果

靈活的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：研究者可根據(jù)需要選擇直接轉(zhuǎn)染或激活后轉(zhuǎn)染，平衡效率與細(xì)胞狀態(tài)的需求

臨床應(yīng)用潛力：為CAR-T等細(xì)胞治療產(chǎn)品的開發(fā)提供了新的技術(shù)路徑

結(jié)論

ProteanFect轉(zhuǎn)染試劑盒在本研究中展現(xiàn)出卓越的性能，不僅證實(shí)了Naive T細(xì)胞直接轉(zhuǎn)染的可行性，還提供了激活后轉(zhuǎn)染的高效方案。這一技術(shù)突破為免疫細(xì)胞基因編輯研究提供了更靈活、更高效的工具，將助力基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用的快速發(fā)展。

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